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A história de Portal possui um número de personagens ricamente detalhados.

Personagens
Os personagens estão listados em ordem de aparição.

Chell
Chell é a protagonista principal e o personagem que você controla durante a história single player de Portal e Portal 2. Ela extremamente tenaz, e é notável por possuir uma atitude de "nunca desistir", como foi visto na história em quadrinhos Portal: Lab Rat. Ainda que em ambos os jogos ela não fale, ela interage silenciosamente com o mundo a sua volta.

GLaDOS
GLaDOS (Genetic Lifeform and Disk Operating System, ou Forma de Vida Genética e Sistema Operacional de Disco) é a antagonista primária em Portal e Portal 2. Ela é um computador sensitivo que foi construída para ajudar na vigilância, e mais tarde no controle geral do Centro de Enriquecimento Aperture Science. Vívida e sarcástica, sua tonalidade e modo de falar é, geralmente, surpreendentemente humano, mas com uma fria precisão calculista que apenas um computador pode fazer.

Doug Rattmann
Doug Rattmann é um ex-empregado da Aperture Science.

Weighted Companion Cube
O Weighted Companion Cube (Cubo Companheiro Pesado) é uma variante do Weighted Storage Cube. Ele é apresentado ao jogador em uma das últimas câmaras de teste em Portal, e serve de protetor e assistente pelo nível. Na sequência, o Companion Cube foi atualizado, assim como muito do equipamento da Aperture Science, notavelmente com a adição de uma música leve que toca sempre que o jogador o segura.

Wheatley
Wheatley é um núcleo de personalidade senciente que ajudou a manter Aperture Science. Ele começa Portal 2 como seu companheiro e o guia pelas partes iniciais do jogo, e tenta ajudar o jogador a escapar de GLaDOS.

Cave Johnson
Em algum ponto de sua carrera como um vendedor de cortinas, Cave Johnson decidiu se juntar a área da ciência. Como resultado, ele fundou e desenvolveu a Aperture Science Innovations, um nível de teste para invenções de natureza científica. Agora provavelmente morto, gravações de sua voz continuam para guiar indivíduos de teste pelas várias câmaras de teste que podem ser encontradas pela Aperture Science.

Caroline
Caroline foi a assistente de Cave Johnson.

Atlas
Atlas é um robô sensitivo criado por GLaDOS dos restos de um núcleo de conhecimento para a proposta de testes cooperativos com sua parceira P-body. Seu olho e algumas marcas pelo corpo são azuis, enquanto ele atira portais azuis e roxos de seu Dispositivo de Portal de Mão Aperture Science. Ainda que não seja capaz de falar como humano, ele possui uma voz de robô masculina meio nervosa.

P-body
P-body é uma robô sensitiva criada por GLaDOS dos restos de uma torreta para a proposta de testes cooperativos com seu perceiro Atlas. O olho "dela" e algumas marcas pelo seu corpo são laranja, enquanto ela atira portais laranjas e vermelhos de seu Dispositivo de Portal de Mão Aperture Science. Ainda que não seja capaz de falar como humano, P-body é apresentada como inquisitiva e confiante, além de um lado meio feminino.

Locutor
O Locutor (Announcer) guia o jogador pelo complexo no inicio de Portal 2.